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熒光定量PCR儀操作與維護簡述

點擊次數(shù)：1191 更新時間：2020-01-15

簡單的說，熒光定量PCR儀就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。

目前，常用的技術，可以將一段基因復制為原來的一百億一千億倍。根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實時熒光定量PCR儀四類。

熒光定量PCR儀實驗操作注意事項：

盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應該注意：

1、戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套；

2、使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；

3、避免反應液飛濺，打開反應管時為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；

4、操作多份樣品時，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的度；

5、加入反應模板，加入后蓋緊反應管；

6、熒光定量PCR儀操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性；

7、盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染，使用可替換或高壓處理的加樣器。

如沒有這種特殊的加樣器，少PCR操作過程中加樣器應該，不能交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū)；

8、熒光定量PCR儀重復實驗，驗證結果，慎下結論。