熒光定量PCR儀，由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成，用來監(jiān)測(cè)循環(huán)過程的熒光。與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對(duì)于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實(shí)時(shí)設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來彌補(bǔ)背景熒光的差異。正常化后可以設(shè)定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。

　　在qPCR進(jìn)程中，隨著產(chǎn)物的積累，熒光信號(hào)的強(qiáng)度等比加強(qiáng)。每經(jīng)過一次循環(huán)，收集一次熒光信號(hào)，即可得到一個(gè)熒光擴(kuò)增曲線，根據(jù)熒光強(qiáng)度的變化即可監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化。熒光擴(kuò)增曲線可分為三個(gè)階段，即熒光背景信號(hào)階段、熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段，PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，因此可以在該階段進(jìn)行定量分析。為了便于對(duì)所檢測(cè)樣本進(jìn)行比較，在指數(shù)期需要設(shè)定一個(gè)熒光信號(hào)的閾值。檢測(cè)到的熒光信號(hào)超過閾值則被認(rèn)為是真正的信號(hào)。熒光信號(hào)由本底進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)階段的閾值所對(duì)應(yīng)的循環(huán)次數(shù)稱為Ct值。模板的Ct值與其起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，則Ct值越小利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品及其相應(yīng)的Ct值可繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得未知樣品的Ct值后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線便可準(zhǔn)確計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。